Домой

Экспрессия генов раково-тестикулярных антигенов при меланоме кожи человека 14. 01. 12 онкология 03. 01. 04 биохимия




Скачать 369.53 Kb.
НазваниеЭкспрессия генов раково-тестикулярных антигенов при меланоме кожи человека 14. 01. 12 онкология 03. 01. 04 биохимия
страница2/2
Дата26.01.2013
Размер369.53 Kb.
ТипАвтореферат
Результаты исследования и их обсуждение
Анализ экспрессии генов по кривым Каплана – Майера.
Исследование прогностического значения
Список опубликованных работ по теме диссертации
4. Д.А. Ковалевский
Подобные работы:
1   2
^

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ


Исследования экспрессии генов РТА и МДА, а также последующий двумерный иерархический кластерный анализ данных ОТ-ПЦР позволили выделить шесть групп клеточных линий (рисунок 1). Культуры клеток, отнесенные к кластеру 1, являются высокодифференцированными, к кластерам 2 и 3 - умереннодифференцированными, тогда как к кластерам 4, 5 и 6 – низкодифференцированными. Сопоставление «морфологических» и «генетических» групп указывает на отчетливую корреляцию между делением клеточных культур в соответствии с экспрессией РТА и ДМА генов и классификацией культур по степени их дифференцировки. Коэффициент корреляции между морфологическими ранжированными данными и кластерным ранжированием данных экспрессии генов составляет 0,92. Степень дифференцировки клеток, как графически отображено на рисунке 1, падает слева направо, сопровождаемая ростом числа и степени экспрессии генов РТА. При этом форма клеток, эпителиальная, веретенообразная или невусоподобная, не коррелирует ни со степенью дифференцированности клеток, ни с экспрессией РТА. Интересно отметить, что экспрессия ДМА генов, в значительной степени изменяющаяся от кластера к кластеру (например, 1 и 2 или 5 и 6), не коррелирует ни со степенью дифференцировки клеток, ни с их формой, ни с активностью генов РТА. Значение и частота экспрессии генов РТА в клеточных линиях меланомы, полученных от различных метастазов меланомы, не однородны. Гены, входящие в группу G2a (рисунок 1) генов РТА, экспрессируются более часто и на более высоком уровне, чем другие гены РТА.





Рисунок 1. Двумерный кластерный анализ экспрессии генов РТА и ДМА методом ОТ-ПЦР в культурах клеток меланом

Представлены результаты полно связного кластерирования (по обоим направлениям) данных по экспрессии 22 генов в 21 культуре клеток, полученных от пациентов с диссеминированной меланомой. Цветовая шкала, приведенная на двумерной кластерной картине и на врезке, соответствует исходной интенсивности полос на электрофореграммах, а не их логарифмированному преобразованию, использованному для расчета связности при кластерировании. Гены обозначены символами в соответствии с таблицей 1. Шкалы коэффициентов корреляции генов (слева) и культур клеток (сверху) отвечают корреляции для узлов дерева. Дендрограмма культур клеток однозначно разбивает все клеточные линии на 6 групп, отсеченных по коэффициенту корреляции 0,75.








Рисунок 2. Двумерный кластерный анализ экспрессии генов РТА и ДМА методом ОТ-ПЦР в первичных опухолях и метастазах меланомы в лимфатические узлы

Представлены результаты полно связного кластерирования (по обоим направлениям) данных по экспрессии 28 генов в 27 биопсиях, полученных от пациентов с меланомой (PL – первичная опухоль, LN – метастазы меланомы в лимфатические узлы). Цветовая шкала, приведенная на двумерной кластерной картине и на врезке, соответствует исходной интенсивности полос на электрофореграммах, а не их логарифмированному преобразованию, использованному для расчета связности при кластерировании. Гены обозначены символами в соответствии с таблицей 1. Шкалы коэффициентов корреляции генов (слева) и биопсий (сверху) отвечают корреляции для узлов дерева. Дендрограмма биопсий однозначно разбивает все биопсии на 6 групп, отсеченных по коэффициенту корреляции 0,75.


Для оценки распределения активности генов в тканях меланомы были проанализированы паттерны экспрессии в препаратах суммарной РНК случайным образом отобранных 17 первичных опухолей меланомы на различных стадиях болезни (включая пациентов с дистальными метастазами) и 10 образцов метастазов меланомы в лимфатические узлы (других пациентов). На рисунке 2 показано распределение кластеров генов РТА, МДА и маркеров меланомы.

Сравнение экспрессии генов (рисунки 1 и 2) показывает, что, в общем, экспрессия генов РТА имеет подобное распределение в первичных опухолях, метастазах меланомы в лимфатические узлы и в клеточных линиях меланомы.

Наиболее транскрибируются гены в семействах MAGE A2, A3, A6 и A12, а наименьшая экспрессия характерна для генов MAGE B1 и B2. В эксперименте использовали данные экспрессии соответствующих генов для первичных опухолей и метастазов в лимфатические узлы для анализа пропорции тканей, неспособных экспрессировать «значительный уровень» каждого анализируемого гена или, по крайней мере, одного из генов РТА и МДА. Условно приняли за «значительный уровень» интенсивность электрофорезных полос ОТ-ПЦР соответствующих генов, равных (или больше) одной трети интенсивности электрофорезной полосы ОТ-ПЦР для гена GAPDH. Это равнозначно темному квадрату на рисунке 2: по оси у - пациент №5, по оси х -зонд для гена MG-A6. Результаты такого анализа показаны на рисунке 3. По крайней мере, один из генов РТА экспрессирует «значительный уровень» в 90% образцов метастазов меланомы в лимфатические узлы по сравнению с 60% образцов первичной меланомы. Ни один из генов РТА не экспрессируется более, чем в 60% образцов метастазов меланомы в лимфатические узлы или первичных опухолей меланомы. Гены маркеров меланомы, за исключением MIA, показывают тенденцию к снижению экспрессии в метастазах меланомы в лимфатические узлы ITGB3 и MFI2, а также S100B и MCAM. Гены, кодирующие компоненты меланина в меланосомах, по-видимому, инактивированы случайным образом. Исследовав экспрессию генов раково-тестикулярных антигенов, генов дифференцировочных меланоцитных антигенов и генов маркёров меланомы в клеточных линиях, первичных опухолях и метастазах в лимфатические узлы необходимо было определить прогностическое значение этих генов при опухолевом процессе.

На основании результатов предыдущего исследования и литературных данных, ассоциирующих увеличение активности генов РТА генов с инициацией метастазирования, ожидалось наличие обратной корреляции между активностью РТА генов в первичной меланоме с продолжительностью жизни пациентов.





Рисунок 3. Вероятность экспрессии генов РТА и МДА в случайно выбранных образцах метастазов лимфатических узлов и первичных опухолей

Одна треть геометрического среднего значения для интенсивности электрофорезной полосы ОТ-ПЦР GAPDH взято за уровень отсечки для «значительно» экспрессирующихся генов. Вероятности получить «значительный уровень» экспрессии в 10 образцах метастазов в лимфатические узлы и 17 образцах первичной меланомы (LN – голубые колонки , PL – коричневые колонки) не от одних и тех жу пациентов рассчитаны и нанесены на график для каждого гена. Отдельно (справа) нанесены на график значения вероятности получить «значительный уровень» экспрессии хотя бы одного гена, принадлежащего к группе из 15 генов РТА, одного из 4 генов меланосом (MLANA, SILV, WARS и TYR) и одного из 5 генов маркеров меланомы (MIA, MCAM, MFI2, S100B и ITGB3). Колонки вероятностей обозначены соответственно гены РТА, меланосома и меланома.

Для решения этой задачи необходимо было проанализировать транскрипционную активность генов РТА, МДА и ММ. Кроме того, в исследование было включено дополнительно восемь генов различной этиологии: гены BCL6, SPP1, TNC, FN1, ассоциированные с инициацией метастазирования, и гены NME1, CDKN2A (INK и ARF), TRPM1, DPP4, служащие скорее онкосупрессорами (репрессорами метастазирования). Утрата активности последних ассоциирована с инициацией метастазирования по литературным данным (см. таблицу 1). Предполагалось наличие разнонаправленной корреляции между активностью этих генов и прогнозом заболевания. Полученная в результате картина экспрессии оказалась более сложной, чем ожидалось. Рисунок 4 показывает результаты двумерного кластерного анализа транскрипционной активности 32 генов в 26 препаратах первичной кожной меланомы человека. Дендрограмма в верхней части рисунка выделяет три кластера (группы) пациентов С1, С2 и С3 с различным течением болезни, отвечающей пятилетней выживаемости в 11%, 100%, и 89% соответственно (с ORC1/(C2+С3) = 128 и относительным риском RRC1/(C2+С3) = 15.1). Средняя продолжительность жизни после операции для первой группы 25±23 месяца (при 95% доверительном интервале в 22 мес., р=0.001, факторе риска смерти 89% и риска метастазирования 100%) и ожидаемое время появления метастазов 6.2 ±4 месяцев. Группа С3 характеризуется столь же высокой пятилетней выживаемостью, как и группа С2 (р = 0.57), но значительно отличается от последней по вероятности метастазирования опухоли за пятилетний срок с фактором риска метастазирования для С2 = 0%, а для С3 = 56% при ожидаемом времени появления метастазов 18.6±14 мес. (при 95% доверительном интервале в 12 мес., р = 0.015). Если рассматривать принадлежность генной экспрессии в первичной опухоли к кластеру С1 в качестве независимого прогностического теста на выживаемость пациента после операции, то специфичность и чувствительность такого теста с учетом приведенных данных составляет 90% и 94% соответственно, что значительно превышает показатели других прогностических тестов, включая измерение митотического индекса, гистологических и других описанных в литературе тестов для больных с меланомой. Напротив, распределение пациента по картине экспрессии генов к группе С2 со специфичностью 78% и чувствительностью 100% предсказывает состояние полного выздоровления, а отнесение пациента по карте экспрессии генов к группе С3, хотя и предсказывает высокую вероятность пятилетней выживаемости, но одновременно предсказывает, что с вероятностью 56% за пятилетний период после операции у пациента появятся метастазы.





Рисунок 4. Двумерный кластерный анализ экспрессии генов РТА и ДМА методом ОТ-ПЦР в первичных меланомах кожи человека

Представлены результаты полно связного кластерирования (по обоим направлениям) данных по экспрессии 32 генов в 26 первичных меланомах. Гены обозначены символами в соответствии с таблицей 1. Справа от картины двумерного кластерирования приведена таблица коэффициентов корреляции между уровнем экспрессии генов и временем появления новых метастазов; уровнем экспрессии генов и временем между операцией по удалению первичной меланомы и смертью пациента. Уровни коэффициентов с р< 0.08 отмечены цветом зеленым при благоприятном прогнозе (позитивной корреляции), красным и розовым при негативной корреляции.


^ Анализ экспрессии генов по кривым Каплана – Майера. Несмотря на высокую специфичность и чувствительность метода двумерного кластерирования, он обладает существенным недостатком для практического применения из-за необходимости одновременного анализа множества пациентов. В то же время анализ корреляции активности каждого индивидуального больного или каждого отдельного гена не обеспечивает специфичности и чувствительности теста, значительно превышающего чувствительность и специфичность других известных прогностических критериев. Картина двумерного кластерирования генов (левая дендрограмма, рисунок 4) и анализ корреляции активности генов со временем жизни пациентов после операции и временем появления у них новых метастазов, а также с другими клинико-морфологическими признаками, позволил выявить группы генов значимо (р< 0.05) положительно коррелирующими или отрицательно коррелирующими с ними. Это группы G2a и G2b, отмеченные на рисунке 4 слева, и отдельные гены, отмеченные справа цветными цифрами, свидетельствуют (при увеличении транскрипции гена) о благоприятном прогнозе по обоим клиническим признакам (зеленый цвет), о неблагоприятном прогнозе по выживаемости (красный цвет), о неблагоприятном прогнозе по скорости появления метастазов (розовый цвет). Объединение генов в группы со сходным прогностическим профилем и вычисление разности средних значений логарифма нормированной концентрации соответствующих мРНК позволяет получить несколько независимых прогностических критериев, пригодных для характеристики индивидуального пациента без необходимости проведения кластерного анализа. Применение одного из таких критериев (G2b-G2a) для анализа прогноза течения заболевания по кривым Каплана – Майера показаны на рисунке 5. Видно, что при значении (G2b-G2a) < 0 все 100% пациентов выживают более 80 месяцев после операции, и только четверть из них это время живет с медленно прогрессирующими метастазами. В то же время 75% пациентов при значении (G2b-G2a) > 0 погибает за 80 месяцев, а 60% за 20 месяцев. Новые метастазы у этих пациентов появляются в основном за 10 месяцев, а смерть наступает через 20 месяцев после этого. Специфичность и чувствительность распределения на группы с положительным и отрицательным значением (G2b-G2a) по отношению к смертности составляет 75% и 100%, а по отношению к вероятности оставаться свободным от признаков заболевания 83% и 75% соответственно, при OR =7.5 и относительном риске RR= 2.6.





Рисунок 5. Кривые Каплана - Майера для выживания (синие) и метастазирования (розовые) для двух групп пациентов L и H

Пациенты были отнесены к группе L (G2bG2a), если меньше 1. В кластер генов G2a входят гены SPP1, TNC, FN1, DDP4, ITGB3, BCL6 и TIMP1. Среднегеометрическое для них вычисляется с весовыми коэффициентами 6.6, 1.5, 0.3, 104.1, 13.4, 17.3, 0.2, обратно пропорциональными представленности данных мРНК в клетке. В кластер генов G2b входят NME1, MCAM, WARS, SILV, MLANA, TRPM1, CTAG1, MFI2. Среднегеометрическое для них вычисляется с весовыми коэффициентами 3.6, 1.3, 0.8, 0.1, 0.2, 71.9, 87.7, 32.0, обратно пропорциональными представленности мРНК этих генов в клетке.

В заключение стоит отметить, что теоретически наилучшими кандидатами для вакцины могут быть продукты генов РТА. Они не экспрессируются в обычных клетках с HLA молекулами, но экспрессируются в большинстве опухолевых клетках. Многочисленные моновалентные и поливалентные иммунотерапевтические методы, основанные на использовании РТА, имеют ограниченную эффективность. Генетическая нестабильность и клональность являются основными свойствами присущими опухолевому росту. Хорошо известно, что опухолевые клетки в первичных опухолях чрезвычайно гетерогенны. Вместе с тем клетки в первичной опухоли гетерогенны по сравнению с клетками метастазов опухоли. Меланома не является исключением, гены РТА в том числе. Потеря экспрессии генов РТА и антигенпредставляющих молекул в первичной опухоли в метастазах не редкое событие. Вероятно, не следует ожидать, что иммуностимулирующее лечение вакциной, содержащей один (даже очень хорошо экспрессирующийся) антиген, может полностью уничтожить злокачественные клетки в формирующейся первичной опухоли или метастазе. Рано или поздно злокачественные клетки ускользают от надзора иммунной системы. Таким образом, если иммуностимулирующее лечение успешно против нескольких антигенов, чья экспрессия положительно коррелирует со злокачественностью клеток, экспрессирующих антигены, или отрицательно коррелирует с выживаемостью пациента, то можно надеяться, что лечение уменьшит развитие болезни посредством удаления более агрессивных клеток и уменьшения числа клеток в непрерывном состоянии трансформации. Поэтому необходимо отслеживать гены, кодирующие антигены-мишени и антиген-процессирующие молекулы. Для каждого пациента, возможно, необходима подходящая настройка антигенного набора для иммунотерапии с ожидаемым изменением в антигенном узоре со временем. Анализ экспрессии генов-кандидатов в биопсиях метастазов опухоли в лимфатические узлы и выбор подходящих полученных клеточных линий как продуцентов подходящих антигенов может временно помочь решить присущую опухоли проблему нестабильности. Для реализации этого метода необходимо исследовать изменчивость паттерна экспрессии генов РТА в биопсиях метастазов опухоли в лимфатические узлы различных пациентов и изменять паттерн в течение последующих обследований в случае рецидива заболевания.

Следовательно, клеточная линия для вакцинотерапии должна иметь максимальное разнообразие генов РТА, и до применения вакцинотерапии требуется провести анализ на их экспрессию у пациента. Индивидуальная клеточная линия, предназначенная для использования при вакцинации пациента, должна экспрессировать гены РТА, которые экспрессируются у данного пациента и в первичной опухоли и метастазах в лимфатические узлы. Необходимы дальнейшие исследования для оценки распределения экспрессии генов РТА и МДА среди множественных локальных микрометастазов у одного пациента, а также динамичность и распределение экспрессии генов в локальных и дистальных метастазах.

^ Исследование прогностического значения экспрессии набора генов в биопсии первичной меланомы (см. рисунок 4), полученной после хирургической операции, является экспериментальным исследованием, проведенном на небольшом количестве пациентов. Такое количество пациентов не позволяет их разделить на подгруппы по морфологическому или клиническому признаку. Исследование не включает в анализ генетические признаки, такие, например, как наличие полиморфизмов в генах, ассоциированных с кожной меланомой: наследуемые мутации CDKN2A, CDK4, MC1R , MDM2 и ненаследуемые (соматические) мутации BRAF, EGF, NRAS, HRAS, RET, PIK3CA, WT1. Данное исследование прогностического значения экспрессии набора генов продемонстрировало, что возрастание числа экспрессирующихся генов РТА не означает короткую выживаемость (до 20 месяцев) для пациентов, а свидетельствует о большей вероятности образования метастазов в течение 100 месяцев. В субпопуляции пациентов, экспрессирующих в первичной опухоли хотя бы один из РТА генов, гены GAGE4, GAGE6 и MAGEC1 показывают значимую (p<0.05) положительную корреляцию (r>0.4) уровня их экспрессии с продолжительностью жизни пациентов после операции. Отсутствие связи между корреляцией экспрессии генов со стадией заболевания и корреляцией ее с прогнозом заболевания характерно не только для генов РТА. Например, при повышенном уровне экспрессии генов GAGE4, GAGE5, GAGE6, MAGEC1, DPP4, FN1 прогноз по времени жизни после операции и времени до появления новых метастазов благоприятный, экспрессия генов GAGE4, GAGE5, GAGE6, MAGEC1, FN1 растет со стадией заболевания, а экспрессия гена DPP4 падает. При повышенном в первичной опухоли уровне экспрессии генов WARS и MFI2 прогноз по обоим клиническим признакам неблагоприятный, при экспрессии гена MCAM по времени жизни после операции также неблагоприятный. Повышенная экспрессия гена S100B в первичной опухоли соответствует неблагоприятному прогнозу по времени появления метастазов, хотя в метастазах меланомы экспрессия гена MFI2, а также гена ITGB3 практически отсутствует. Кроме того, экспрессия генов MCAM и S100B значительно снижена. Данное исследование предлагает независимые прогностические факторы на выживаемость пациента после хирургической операции и склонность опухоли к метастазированию. Анализ экспрессии (на уровне мРНК) выбранных для исследования генов (РТА, МДА, ММ) в биоптатах первичной опухоли позволил разделить всех пациентов на три группы приблизительно с 10% вероятностью выживания в течение 5 лет, с 90% вероятностью выживания при 60% вероятности рецидивирования за тот же срок и c 100% вероятностью выживания при отсутствии признаков заболевания в течении более чем 80 мес. после операции. Тест, опробованный на ограниченной популяции 26 пациентов вертикальной фазы роста опухоли, показал более, чем 90% специфичность и чувствительность, что заслуживает апробации на широкой популяции пациентов.

ВЫВОДЫ


1. Исследована экспрессия генов раково-тестикулярных антигенов, генов меланоцитодифференцировочных антигенов и генов маркеров меланомы в клеточных линиях меланомы, первичных опухолях и метастазах меланомы в лимфатические узлы.

2. Выявлена гетерогенность экспрессии генов раково-тестикулярных антигенов (РТА) в клетках меланомы кожи. Каждый ген экспрессирован не более, чем в 60% исследованных образцов первичных опухолей, метастазов меланомы в лимфатические узлы, а также клеточных линий меланомы. При изучении набора из 22 генов раково-тестикулярных антигенов выявлена экспрессия хотя бы одного гена в 90% исследованных образцов.

3. При снижении степени дифференцировки клеток культуры меланомы возрастает число экспрессирующихся генов раково-тестикулярных антигенов. Обнаружена обратная корреляция (p<0.05) между экспрессией 16 генов раково-тестикулярных антигенов (MAGEA 1-3, 6, 10 и 12; GAGE 1-8; BAGE; MAGEC1) и степенью дифференцировки клеток меланомы в культуре.

4. Увеличенное количество экспрессирующихся генов РТА в первичной опухоли, которое наблюдалось только в одной трети биопсий пациентов, не означает короткую выживаемость (до 20 месяцев) для пациентов, а свидетельствует о большей вероятности образования метастазов в течение 100 месяцев жизни пациентов. В группе пациентов, экспрессирующих хотя бы один из РТА генов (MAGEB2, MAGEB4, MAGEA1, MAGEA4 и MAGEA10), показана значимая (p<0.05) положительная корреляция (r>0.4) с продолжительностью жизни пациентов после операции.

5. Набор экспрессирующихся на уровне мРНК 40 генов (РТА, МДА, ММ) может использоваться как группа прогностических факторов продолжительности жизни пациента после хирургической операции и риска появления метастазов. Анализ экспрессии (на уровне мРНК) генов в биоптатах первичной опухоли, независимо от наличия у пациентов метастазов и стадии заболевания, позволяет разделить пациентов на три группы: первая группа - с 90% вероятностью смерти в течение 20 месяцев и образованием метастазов; вторая группа - с 10% вероятностью смерти и 60% вероятностью образования метастазов в течение 100 месяцев; третья группа - c 100% вероятностью выживания при отсутствии метастазов в течение 100 месяцев после операции.

6. Показано отсутствие корреляции (р<0,05) между экспрессией дифференцировочных антигенов меланомы (MLANA, TYR, WARS, SILV) и степенью дифференцировки клеток меланомы в культуре.

7. Клеточная линия для вакцинотерапии пациентов с меланомой кожи должна иметь максимальное разнообразие генов РТА, потому что у различных больных экспрессируется различный набор генов РТА.
^

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ


1. И.Н. Михайлова, Д.А. Ковалевский, О.С. Бурова, В.А. Голубева, Л.Ф. Морозова, Е.С. Воронина, И.А. Утяшев, Г.С. Аллахвердян, С. Субраманиан, Т.Т. Кондратьева, Е.А. Черемушкин, С.Л. Киселев, Л.В. Демидов, А.Ю. Барышников, Р.Ш. Бибилашвили Экспрессия раково-тестикулярных антигенов в клетках меланомы человека. // Сибирский онкологический журнал. — 2010. — Т.1. — С. 29-39.

2. IN Mikhaylova, DA Kovalevsky, LF Morozova, VA Golubeva, EA Cheremushkin, MI Lukashina, ES Voronina, OS Burova, IA Utyashev, SL Kiselev, LV Demidov, RSh Beabealashvilli, AY Baryshnikov. Cancer/testis genes expression in human melanoma cell lines. // Melanoma Res. — 2008. — Vol. 18, № 5. — P. 303-313.

3. Д.А. Ковалевский, И.Н. Михайлова, Л.Ф. Морозова, О.С. Бурова, В.А. Голубева, Е.С. Воронина, Е.А. Черемушкин, И.А. Утяшев, Г.С. Аллахвердян, Н.Н. Петенко, Т.Т. Кондратьева, С.Л. Киселев, Л.В. Демидов, Р.Ш. Бибилашвили, А.Ю. Барышников Экспрессия генов раково-тестикулярных антигенов при определение степени дифференцировки клеток меланомы кожи. // Сборник статей международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация". Пущино, 2-4 июня 2009. — 2009. — Т. 1. — С. 55-58.

^ 4. Д.А. Ковалевский, И.Н. Михайлова, Л.Ф. Морозова, О.С. Бурова, В.А. Голубева, Е.С. Воронина, Е.А. Черемушкин, И.А. Утяшев, Г. С. Аллахвердян, Н.Н. Петенко, Т.Т. Кондратьева, С.Л. Киселев, Л.В. Демидов, Р.Ш. Бибилашвили, А.Ю. Барышников. Экспрессия раково-тестикулярных генов при определении степени дифференцировки клеток меланомы кожи. Материалы VII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты», 21-22 апреля 2009, Москва. // Российский биотерапевтический журнал. — 2009. — Т. 8, № 2. — C. 64.

5. И.Н. Михайлова, Д.А. Ковалевский, О.С. Бурова, М.И. Лукашина, Л.Ф. Морозова, В.А. Голубева, Н.Н. Петренко, Е.А. Черемушкин, Л.В. Демидов, А.Ю. Барышников, С.Л. Киселев, С.С. Ларин, Г.П. Георгиев, Р.Ш. Бибилашвили. Клеточные линии меланомы. Материалы V симпозиума «Биологические основы терапии онкологических заболеваний». // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. — 2006. Т. 5, № 4. — C. 15.

6. И.Н. Михайлова, Д.А. Ковалевский, Я.В. Вишневская, И.А. Утяшев, В.А. Голубева, О.С. Бурова, Л.Ф. Морозова, Е.А. Черемушкин, Т.Т. Кондратьева, С.Л. Киселев, Л.В. Демидов, А.Ю. Барышников, Р.Ш. Бибилашвили. Экспрессия генов раково-тестикулярных антигенов в первичной меланоме кожи человека. // Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН. — 2010. — Т. 2. — С. (принята к печати).



1   2

Скачать 369.53 Kb.
Поиск по сайту:



База данных защищена авторским правом ©dogend.ru 2019
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Уроки, справочники, рефераты