Домой

Влияние лазерной реваскуляризации печени на течение портальной гипертензии у больных циррозом (экспериментальное и клиническое исследование) 14. 00. 27 хирургия




НазваниеВлияние лазерной реваскуляризации печени на течение портальной гипертензии у больных циррозом (экспериментальное и клиническое исследование) 14. 00. 27 хирургия
страница2/5
Дата21.01.2013
Размер0.67 Mb.
ТипИсследование
Содержание диссертационного исследования
Материалы и методы экспериментального исследования
Подобные работы:
1   2   3   4   5
^

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования


Для реализации поставленной цели был выполнен экспериментальный раздел работы с последующими клиническими испытаниями. В качестве источника излучения использовали диодный лазер SHARPLAN 6020 (Израиль) ( - 810 нм).
^

Материалы и методы экспериментального исследования



Эксперимент осуществлён на 72-х здоровых разнополых беспородных кроликах, разделённых на две группы (табл. 1). Их средняя масса тела перед началом эксперимента составляла 3,9 кг. Животные содержались в условиях вивария, для каждого из них была предусмотрена отдельная клетка, в которой по мере загрязнения поводилась уборка. Помещение проветривалось. Ежедневно кролики получали пищу и воду. Все манипуляции на животных выполнялись в соответствии с требованиями этического комитета СПбГМУ им. академика И.П. Павлова, разработанными на основе Хельсинской декларации.

Таблица 1

Общая характеристика экспериментальных животных

Группы

Количество

животных

Вид воздействия на печень

индукция цирроза печени

индукция цирроза + его естественный патоморфоз

воздействие лазером

I (1)

6

-

-

-

I (2)

10

-

-

+

II (1)

6

+

-

-

II (2)

9

+

+

-

II (3)

11

+

-

+

Всего:

42 (+30 погибли)











Кролики первой (контрольной) группы (16) были разделены на две подгруппы. У животных первой подгруппы (6) была изучена нормальная гистоструктура печени, второй (10) - оценена динамика морфологических изменений в печени после воздействия на неё высокоинтенсивного лазерного излучения на 7-е – 14-е (2), 21-е – 30-е (8) сутки с момента выполнения операции. Вторую группу (56) составили кролики, у которых подкожным введением 2 раза в неделю 40 %-го раствора четырёххлористого углерода (CCL4) в подсолнечном масле из расчёта 0,3 мл/кг в течение 4-х месяцев создавался цирроз печени (Шалимов, С.А. 1989). Оставшиеся в живых (26) спустя 4 месяца разделили на три подгруппы. У кроликов первой подгруппы (6) были оценены морфологические изменения в печени после индукции цирроза печени CCL4. Во вторую (9) вошли животные, у которых исследовали естественный патоморфоз цирроза печени, индуцированного CCL4, на 7-е - 14-е (2), 21-е – 30-е (7) сутки после завершения введения препарата. У кроликов третьей подгруппы (11) были изучены морфологические изменения в печени кроликов после индукции цирроза печени CCL4 и воздействия на неё высокоинтенсивного лазерного излучения на 1-е (2), 7 е – 14-е (2), 21-е – 30-е (7) сутки с момента проведения операции.

Животных, которым осуществляли лазерное воздействие (I (2) и II (3) группы), за 18 часов до операции прекращали кормить. Анестезия проводилась посредством внутримышечного введения 0,2 мг/кг 5 %-го раствора кетамина и 0,2 мг/кг 0,25 %-го раствора дроперидола, разведённых в 5-ти мл физиологического раствора. После наступления наркотического сна кролика привязывали к операционному столу. На его брюшке брили шерсть и, обработав операционное поле раствором йода, выполняли срединную лапаротомию длиной 6-8 см. Подведённым через гибковолокнистый кварцевый световод  0,6 мм лазерным лучом ( - 810 нм, Р = 3-5 Вт) в импульсном режиме (продолжительность импульса 0,1 секунды, пауза – 0,25 секунды) создавали 20 каналов на диафрагмальной поверхности печени глубиной до 5-ти мм, время экспозиции - 7-8 секунд. По завершении операции рана передней брюшной стенки послойно зашивалась наглухо.

Кроликов выводили из эксперимента путём передозировки наркотических средств, с последующим утоплением. Животных II (1) группы - через сутки, II (2) - на 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки после окончания введения CCL4; I (2) – на 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки, II (3) – на 1-е, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки после операции. Вскрытия осуществлялись без воды. Извлечённую из брюшной полости печень измеряли обычной сантиметровой линейкой и взвешивали на циферблатных весах с гирями.

Морфологическое исследование печени осуществлялось после фиксации тканей в 10 %-м нейтральном растворе формалина и стандартной гистологической проводки, с применением окрасок гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методу Ван Гизона, Шик-реакции, окраски по Перлсу, суданом III, реакции Фёльгена, импрегнации коллоидным раствором нитрата серебра по J. Crocker и P. Nar, импрегнации серебра по Гомори, фукселин-литиевого кармина по Вейнерту. Для электронно-микроскопического исследования материал обрабатывали по общепринятой схеме, изложенной в соответствующих рекомендациях. Готовые препараты исследовали с помощью трансмиссивного электронного микроскопа ПЭМ-100 (Россия) и просвечивающего электронного микроскопа LIBRA 120 производства фирмы «Karl Zeiss» (Германия). На светооптическом уровне - с использованием микроскопа Helmut Hund 500 GmbH фирмы LEICA (Германия).

Морфометрические исследования проводили с применением окулярной сетки с 25 равноудалёнными точками и 400 равными квадратами (Автандилов Г.Г., 1990), путём подсчёта среднего количества объектов в поле зрения, а также в автоматическом режиме на аппаратно-програмном комплексе с компьютерной обработкой видеоизображения Dia Morph «Cito W» и микроскопа DMRXA LIICA (Германия), MOTIC-IMAGES plus 2,0 и микроскопа «Axiophot» (Германия). В ряде случаев статистическая обработка полученных результатов проводилась при помощи компьютерной программы Dia Morph «IPSO-W».

1   2   3   4   5

Поиск по сайту:



База данных защищена авторским правом ©dogend.ru 2019
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Уроки, справочники, рефераты